Micropipetas
Las micropipetas se utilizan en el laboratorio para transferir pequeñas cantidades de líquido, generalmente hasta 0,1 uL. Son más comúnmente utilizados en laboratorios de química, biología, forenses, farmacéuticos y de descubrimiento de fármacos, entre otros.
🌡 ¿Qué es Micropipeta en química?
Cuando los científicos necesitan entregar volúmenes más pequeños de un líquido de forma exacta y precisa, utilizan una pipeta, un tubo de vidrio calibrado en el que se introduce el líquido y luego se libera.
Las pipetas de vidrio y plástico han sido los pilares de los laboratorios de química y biología durante décadas, y se puede confiar en ellas para dispensar volúmenes de hasta 0,1 mL.
Los biólogos moleculares utilizan frecuentemente volúmenes mucho más pequeños de líquidos en su trabajo, llegando incluso a 0,1µl (¡es decir, una décima parte de un mililitro, o una décima parte de un millón de un litro!). Para volúmenes tan pequeños, necesitan usar una micropipeta.
Las micropipetas reciben muchos nombres diferentes, la mayoría de los cuales se basan en las empresas que las fabrican.
Por ejemplo, se les puede llamar «Gilsons», ya que un gran número de estos dispositivos utilizados en los laboratorios son fabricados por esta empresa.
Independientemente del fabricante, las micropipetas funcionan según el mismo principio: un émbolo es presionado por el pulgar y, a medida que se libera, el líquido se introduce en una punta de plástico desechable. Cuando el émbolo se presiona de nuevo, el líquido se dispensa.
🔬 ¿Qué diferencia existe entre pipeta aforada micropipeta y pipeta graduada?
Pipetas volumétricas
Pipetas volumétricas son usadas para medir un solo volumen con precisión, típicamente hasta 4 cifras significativas. (Los volúmenes típicamente varían de 0.5 a 100 mL) En una pipeta volumétrica, las especificaciones indican:
♦ La cantidad de líquido que se transferirá si el líquido es arrastrado hasta la línea de calibración del cuello.
♦ La temperatura a la que se realizó la calibración (recuerde que el volumen de un líquido cambia con la temperatura)
♦ Tanto si se trata de un dispositivo de medición TD (para entregar) como TC (para contener).
El uso adecuado de una pipeta volumétrica incluye:
- Cuando se vacía una pipeta volumétrica, se deja que el líquido se drene lentamente. Nunca es forzado
- hacia fuera.
- Después de vaciarlo, la pequeña cantidad de líquido que queda en la punta no debe ser soplada.
- Las pipetas volumétricas NO son pipetas de soplado.
👉 Micropipetas
Se utiliza para medir con precisión pequeños volúmenes de líquidos (los volúmenes varían típicamente de 5 a 1000 µL)
Pipetas graduadas
Se utiliza para medir varios volúmenes con una sola pipeta (los volúmenes suministrados dependen del tamaño total de la pipeta).
Micropipeta partes
Las partes básicas de una micropipeta incluyen el botón del émbolo, el botón del expulsor de puntas, el dial de ajuste de volumen, la pantalla de volumen, el expulsor de puntas y el eje.
🧬 Historia de las micropipetas
La micropipeta fue inventada en 1957 en la Universidad de Marburgo, Alemania, por el postdoctor Heinrich Schnitger.
Frustrado por el pipeteado repetitivo de pequeños volúmenes con micropipetas de vidrio, Schnitger desarrolló un prototipo con un pistón de resorte y una punta de plástico extraíble para contener líquidos.
Todas las características principales de las micropipetas actuales fueron incorporadas al prototipo, mostrado arriba, que fue patentado en 1957.
En el fondo de la micropipeta se mueve un pequeño pistón en un orificio hermético. En el extremo cónico se colocan puntas de plástico extraíbles. Gracias a un amortiguador de aire, el líquido no entra en contacto con el pistón.
El volumen se define por un tope fijo o ajustable inferior y superior en el pistón accionado por resorte. Para la liberación completa del líquido, se aplica una mayor presión, la cual presiona un segundo resorte que sostiene el tope inferior.
Simple, elegante y eficaz, la micropipeta revolucionó la manipulación de pequeños volúmenes de líquidos.
Al permitir una transferencia rápida de microvolúmenes, transformó el trabajo bioquímico, médico, molecular y biológico celular y se ha convertido en el dispositivo más utilizado en la ciencia biológica.
📌 Micropipeta precio
Los precios de las micropipetas varían. Es posible encontrarlas desde 60 hasta casi los 1300 dólares. Depende de la calidad del fabricante, el volumen; además de los costos de envío en caso de adquirirlas a través de un portal electrónico.
🔹 Puntas para micropipetas función
Las puntas son una parte importante de la micropipeta y permiten que el mismo dispositivo se utilice para diferentes muestras (siempre y cuando cambie la punta entre muestras) sin necesidad de lavarlas.
Se presentan en diferentes tamaños y colores, dependiendo de la micropipeta con la que se utilicen y del volumen que se vaya a dispensar.
Las puntas más comúnmente utilizadas son:
- Azul Grande – 200-1000µL
- Amarillo pequeño – 2-200µL
- Blanco Pequeño – <2µL
Se cargan en cajas de puntas que a menudo se esterilizan para evitar la contaminación. Por esta razón, las cajas de puntas deben mantenerse cerradas si no están en uso.
Las puntas se cargan en el extremo de la micropipeta empujando el extremo del dispositivo en la punta y dando dos golpecitos agudos.
Una vez utilizadas, las puntas son expulsadas a un contenedor de eliminación de objetos punzantes mediante el botón de expulsión de puntas. Nunca toque la punta con los dedos, ya que esto representa un riesgo de contaminación.
🌡 Cuidados de las micropipetas
Las instrucciones del fabricante se suministran con todas las micropipetas. Por favor, lea y asegúrese de entender cómo operar y cuidar la pipeta.
- Las micropipetas son materiales delicados de presicion, por ello es menester manejarlas con cuidado.
- Manténgase en posición vertical cuando esté en uso para evitar que los líquidos corran dentro del eje de la pipeta.
- No deje las pipetas tiradas en el banco de trabajo donde puedan ser golpeadas y dañadas.
- Antes de utilizarlo, asegúrese de que el volumen ha sido ajustado correctamente.
- La mayoría de las pipetas tienen una pantalla digital de volumen. Algunas marcas tienen un ajuste de micrómetro, que puede ser difícil de leer.
- Compruebe que todas las puntas estén bien ajustadas a la pipeta.
🔬 ¿Cómo pipetear líquidos con una micropipeta?
1. Las micropipetas tienen 3 posiciones:
– Posición de descanso
– Primera parada
– Segunda parada
2. A continuación, debe colocar la punta en el extremo del eje. Luego, proceda a hacer presión hacia abajo, entonces debe girarlo con cuidado para, de esta manera, asegurar que el sellado sea hermético.
3. Es importante que sostenga la pipeta verticalmente, entonces proceda a presionar el embolo hasta el primer tope. El aire igual al volumen del ajuste (por ejemplo, 100 μL) se desplaza.
4. Luego, la punta se debe sumergir en el líquido. Para ello debe soltar el embolo hasta que alcance la posición de reposo.
Después de un segundo, el líquido es aspirado en la punta. El volumen de ajuste de la micropipeta será el mismo al del líquido en la punta.
5. Seguidamente la punta debe ser colocada, contra la pared del envase que recibe el líquido, en un ángulo de 10° a 45.
Presione el émbolo hasta la primera parada, espere un segundo, presione el émbolo hasta la segunda parada para expulsar todo el líquido.
6. Debe apartar el extremo de la punta del líquido. Entonces proceda a soltar el embolo hasta alcanzar la posición de reposo.
☘ Lo que debes evitar hacer con la micropipeta
Dejar caer la pipeta. Si se le cae la pipeta, podría estar fuera de calibración. Así que sé muy gentil y cuidadoso.
Aspirar en la pipeta. Créanos, eso sucede. Si está trabajando con productos químicos agresivos, el tenerlo pegado dentro de la pipeta puede llevar a que se acumule y le dé resultados inexactos.
Gire el dial más allá o por debajo de su rango de volumen. Esto puede romper el indicador de volumen u otros componentes dentro de la pipeta.
Atascar la punta de la pipeta en la pipeta. Esto no sólo puede dañar la punta de la pipeta, sino también el eje de la pipeta. Lo que el atasco significa es que lo más probable es que necesite una punta de pipeta que se ajuste mejor.
Debe ser cauteloso en el manejo de la micropipeta. Se trata de un instrumento muy preciso y, como tal, hay que prestar especial atención a su funcionamiento.
Si nota que está fuera de rango o que no funciona como antes, es hora de repararlo y/o calibrarla.
👉 ¿Cómo calibrar la Micropipeta?
Para llevar a cabo la calibración de la micropipeta se deben realizar los siguientes pasos:
Comprobación de la calibración
Reúna los materiales necesarios
Para comprobar la calibración de una pipeta, necesitará la pipeta, las puntas de pipeta, el agua destilada, un vaso de precipitados, un termómetro, una balanza y botes de pesaje. La balanza debe ser específica para microgramos para calibrar micropipetas con un máximo de 1 µL.
No necesitará más de 5 ml de agua. Llene el vaso con agua.
Asegúrese de que las puntas de las pipetas sean las puntas correctas que se ajusten correctamente a la pipeta.
Mida la temperatura del agua destilada
Coloque el termómetro en el agua y déjelo por lo menos un minuto. Si la línea roja del termómetro sigue moviéndose, déjela un minuto más.
Después de un minuto, registre la temperatura en un cuaderno. Retire el termómetro y séquelo cuando haya terminado.
Conocer la temperatura del agua es importante para los cálculos que se realizarán para comprobar la calibración.
Colocar el recipiente de pesaje sobre la balanza y ponerlo a cero
Lo ideal es utilizar una balanza que tenga puertas y sea una cámara aislada. Colocar el barco de pesaje en la cámara y cerrar las puertas.
Si no tiene puertas, simplemente coloque el barco de pesaje sobre la balanza. Pulsar la tecla «Zero» o «Tare» y esperar hasta que la balanza indique cero.
Poner a cero la balanza resta el peso del barco de plástico y le permite medir sólo el peso de lo que usted puso en el recipiente.
Preparar la pipeta para la calibración
Limpie la pipeta con etanol para eliminar cualquier contaminante antes de comenzar y asegúrese de que nada esté obstruyendo el extremo de la punta de la pipeta.
Coloque la punta apropiada en el extremo y ajuste el volumen que desea probar.
Para la calibración, pruebe tanto el volumen más pequeño como el más grande que la pipeta pueda dispensar.
Pre-enjuague la punta antes de la calibración
Presione el botón hasta el primer tope y pegue la punta en el agua destilada de modo que se sumerja unos 2 mm en el líquido.
Suelte el botón para aspirar un poco de líquido y luego vuelva a dispensar el líquido presionando el botón hacia abajo. Repita esto tres veces para enjuagar previamente la punta.
Presione el botón hasta el segundo tope para dispensar cualquier líquido que quede en la punta y retire la pipeta del agua.
Aspirar el volumen de calibración
Con la punta fuera del líquido, presione el botón hasta el primer tope. Coloque aproximadamente 2 mm de la punta en el agua destilada y suelte el botón para aspirar el líquido en la punta. Espere aproximadamente 1 segundo antes de retirar la punta del agua.
Asegúrese de que la punta esté completamente sumergida durante todo el proceso de aspiración. Usted no quiere burbujas en la punta o los resultados serán erróneos.
Dispensar el líquido en el contenedor de pesaje de la balanza. La punta debe ser conducida hasta el fondo del recipiente de pesaje, una vez hecho esto, hay que hacer presión sobre el botón hasta el primer tope.
Muévase a otro lugar ligeramente alejado del agua y presione el botón hasta la segunda parada. Manteniendo el botón presionado, levante la punta del bote de pesaje.
Mantenga la punta en la pipeta, ya que la volverá a utilizar para pesar más pruebas de calibración.
Debe asegurarse de que la punta no entre en contacto con nada.
Anote el peso en la balanza
Cierre la puerta si está utilizando una balanza de cámara. Espere hasta que los números dejen de cambiar. Anote este número en su cuaderno.
Es importante esperar hasta que el número se haya estabilizado antes de registrarlo. Sus lecturas serán incorrectas si no espera.
Repita este proceso para tomar al menos 10 lecturas
Ponga a cero la báscula, enjuague previamente la punta, aspire el mismo volumen, dispense el volumen y, a continuación, registre el peso.
Usted quiere tener múltiples grabaciones del mismo volumen y luego puede promediarlas todas juntas.
Puede repetir este mismo proceso con volúmenes diferentes siempre y cuando tome varias lecturas por volumen.
Cálculo de los resultados
Defina la fórmula para el volumen calculado
La fórmula para calcular el volumen dispensado por la pipeta es V = w * Z donde w es el peso del agua, Z es el factor de conversión basado en la densidad del agua, y V es el volumen calculado de cuánta agua fue dispensada.
Puedes encontrar la variable Z buscando la densidad del agua usando la temperatura registrada al principio del experimento.
Por ejemplo: Si la temperatura del agua era de 23°C, se utilizará un valor Z de 1,0035 µg/mg.
Promedie de las réplicas juntas
Debe haber pesado el volumen de agua dispensada por la pipeta al menos 10 veces. Para promediar todos estos valores juntos, súmelos y divídalos por 10. Si hizo más o menos ensayos, sume cada ensayo y divida por el número total de ensayos.
Por ejemplo: Los diez pesos que registró para un volumen de pipeta de 10 µl son los siguientes: 9.89, 10.01, 10.02, 9.99, 9.95, 10.04, 9.96, 10.01, 9.99 y 9.98.
El promedio es: (9.89 + 10.01 + 10.02 + 9.99 + 9.95+ 10.04 + 9.96 + 10.01 + 9.99 + 9.98)/10 = 99.84/10 = 9.984
Calcule la precisión de la pipeta
Para calcular la precisión se puede utilizar la ecuación A = 100 x Vavg/V0, donde A es la precisión de la pipeta, Vavg es el volumen medio calculado y V0 es el valor que se ajusta para dispensar la pipeta. La precisión debe estar entre 99-101% [12].
Si la pipeta está correctamente calibrada, el valor calculado debe estar muy cerca del valor real que usted estableció en la pipeta.
Por ejemplo: A = 100 x Vavg/V0 = 100 x 10.019/10 = 100 x 1.0019 = 100.19%.
Esta pipeta en particular está debidamente calibrada.
Si es necesario, envíe la pipeta para su calibración
Si su pipeta no supera la prueba de calibración, deje de utilizarla inmediatamente para realizar experimentos. Las pipetas son equipos de laboratorio muy delicados y caros.
Usted no puede fijar la calibración por sí mismo, por lo que tendrá que enviarlos para que reciban el servicio adecuado. Alternativamente, algunas compañías irán a su laboratorio y calibrarán sus pipetas allí.
Póngase en contacto con la compañía que fabrica su marca particular de pipetas para el mantenimiento.
Seguidamente les presentamos un vídeo en el cual podrá apreciar cómo se realiza el mantenimiento de las micropipetas y la forma más eficiente de manejarlas. De esta manera podrá complementar la información que acaba de obtener.