Quedarás Asombrado Con Las Características Del Microscopio De Fluorescencia, Conócelas Aquí
En los laboratorios o mejor dicho en el ámbito científico la cantidad de herramientas, instrumentos y materiales es asombrosa. Sin embargo son pocos los que se puede decir seriamente que marcan un antes y un después. Este es el caso del microscopio, aparato que nos abrió los ojos a un mundo completamente diferente al nuestro. El poder visualizar objetos u organismos de tamaño mínimo ha cambiado de gran manera nuestra forma de entender las cosas. En este artículo quedarás asombrado con las características del microscopio de fluorescencia, uno de los últimos avances en microscopía.
¿Qué es un microscopio de fluorescencia? 🔬👨🔬
Es un equipo electrónico y mecánico que surge de la modificación o variación de las técnicas básicas de observación del microscopio óptico. Fue creado a inicios del siglo XX por los científicos Carl Reichert, Heinrich Lehmann y August Köhler. Se puede decir que es un microscopio óptico que utiliza la fosforescencia y la fluorescencia. Para el estudio de las sustancias y elementos orgánicos e inorgánicos.
Entonces para aclarar mejor las cosas definamos lo que es fluorescencia, esta es la emisión de luz por parte de una sustancia que previamente ha absorbido radiación o luz. Específicamente es un tipo de fotoluminiscencia. Se diferencia de la fosforescencia en que esta no puede emitir inmediatamente la radiación que recibe.
Principio científico del microscopio de fluorescencia 🔬🦠
La microscopia básica se basa en teñir mediante colorantes los componente celulares que normalmente son incoloros y no se pueden distinguir al microscopio. Entonces mediante el contraste se permite distinguir las estructuras para su estudio. La microscopía de fluorescencia tomó esta idea fundamental y la modifico para su propio uso.
Entonces decidieron suplantar colorantes comunes por tintes fluorescentes que son moleculs capaces de absorber la luz en una longitud de onda específica. Para posteriormente con cierto tiempo de retraso emitir o reflectar su propia luz en una longitud de onda más larga de la que recibió. El retraso entre la absorción y la emisión es realmente insignificante, ya que hablamos de nano segundos. A estos tintes que poseen esta capacidad se les conoce como fluorocromos o fluoróforos.
Entonces una vez hecho este estímulo la segunda luz puede filtrarse para revelar la presencia y ubicación de los fluoróforos. Produciendo una imagen basada en la segunda fuente de luz que es la generada por la muestra. Permitiendo así su estudio posterior.
Partes del microscopio de fluorescencia 🧫🧬
Como ya mencionamos el microscopio de fluorescencia es básicamente un microscopio óptico modificado. Por lo que estructuralmente posee los mismos elementos básicos, entonces solo mencionaremos aquellos que han sido agregados o modificados. Los cuales son los siguientes:
Fluorocromos ó Tintes fluorescentes
Son compuestos químicos fluorescentes típicamente algunos grupos aromáticos combinados a moléculas planas o cíclicas. Los cuales poseen la capacidad de emitir luz tras la excitación por luz, han sido creados en muchísimas versiones. Generalmente se modifican para que se unan a la molécula biológica de interés en el estudio.
Fuente de luz
La luz que se emplea en este microscopio es de ciertos tipos específicos para lograr la correcta absorción y posterior excitación del fluorocromo. Entonces podemos mencionar cuatro tipos que son los más empleados. Se encuentran incluidas la luz LED, lámparas de arcón de xenón, láseres y lámpara de vapor de mercurio.
Filtro de excitación
Es un filtro de banda que solo permite el paso de las longitudes de onda específicas que son absorbidas por el fluorocromo. Minimizando y evitando la excitación por otras fuentes fluorescentes.
Espejo dicroico
Es un segundo filtro un poco más específico, es de tipo color que se emplea para pasar luz de forma selecta en una precisa gama de colores.
Filtro de emisiones.
Es un tercer filtro ya no direccionado a la luz de incidencia si no a la de emisión de la muestra. Es un filtro de banda que solo permite el paso de las longitudes especificas emitidas por el tinte fluorescente. Bloqueando así toda luz no deseada, especialmente la luz de excitación. Así se garantiza una obtención de fluorescencia clara con fondo oscuro.
Usos y aplicaciones del microscopio de fluorescencia 👩🔬💚
La microscopía en general es una herramienta de amplio alcance para lo que son las investigaciones científicas actuales. Cada día mejora un poco más con la aplicación de tinciones especializadas para la identificación de compuestos y estructuras. Entonces podemos decir que su aplicación general es la de identificar estructuras y compuestos en muestras biológicas tanto vivas como fijas.
Ventajas asociadas al microscopio de fluorescencia
- Método popular para el estudio del comportamiento en imágenes de células vivas.
- Especificidad en compuestos por la aplicación de tinciones modificadas para unión a moléculas concretas.
- Alta sensibilidad, específicamente 50 moléculas por micrómetro cúbico.
- Diferenciación molecular en grupo lo que se refiere a que se pueden teñir distintas moléculas de diferentes colores en un mismo estudio.
Mira más sobre el microscopio de fluorescencia aquí
Limitaciones asociadas al microscopio de fluorescencia
- Los fluorocromos presentan una falla en la emisión de fluorescencia cuando son sometidos a un foto blanqueo. Que es un proceso de daño químico a los electrones excitados durante la fluorescencia. Esto podría generar falsos resultados sin evidencia previa.
- Suceptividad celular a la foto toxicidad sin antecedentes previos ante la exposición a longitudes de onda cortas.
- Esta técnica e instrumento solo permite la observación de estructuras específicas con marcado previo. Lo que solo permite analizar el solo objetivo del estudio y no un panorama general.
Ya hemos descrito las principales características del microscopio de fluorescencia, con ello evidenciamos el avance logrado en diferentes equipos y técnicas. Actualmente el estudio biológicos es pilar fundamental de muchos adelantos en medicina y farmacia. Si deseas conocer otros tipos de avances en microscopía visita nuestras próximas publicaciones.
Bibliografía: https://www.aguasresiduales.info/revista/blog/que-es-un-microscopio-de-fluorescencia